サイクリング愛好家やツーリング客も多く訪れる関門トンネル人道ですが、車両の取り扱いには極めて厳格な安全基準が敷かれています。自転車および50cc以下の原動機付自転車は通行可能ですが、トンネル内での乗車・走行は道路交通法および管理規定により一切禁止されています。
安全確保のため、構内では必ずエンジンを切り、サドルから降りて「押し歩き」をしなければなりません。構内各所には監視カメラが設置されており、万が一乗車した場合はスピーカーから直接注意のアナウンスが流れます。他の歩行者との接触事故を防ぐためにも、マナーの遵守が強く求められます。
なお、自転車・原付の通行料金20円は、エレベーターを降りた先のトンネル入口に設置されている「料金箱」に現金を直接投入するシステムです。お釣りは出ないため、事前に20円（10円玉2枚）を用意してエレベーターホールへ向かうのがスムーズです。
