上尾先生（本名：上尾ますみ）は、ふたば幼稚園のさくら組を受け持つ教諭です。年齢は23歳。よしなが先生（みどり）の産休に伴う代理教員としてふたば幼稚園へやってきた経歴を持ちます。当初は臨時採用という立ち位置でしたが、よしなが先生の復職後もその指導力や人柄が認められ、そのまま正規の担任として定着しました。
アニメにおける初登場回は、1998年11月13日放送の「上尾先生が来たゾ」です。初登場時は極度の男性恐怖症や対人緊張を抱えており、園長先生やしんのすけの突拍子もない行動に怯えてばかりでした。しかし、園児たち一人ひとりと真摯に向き合う優しさと責任感を持っており、今やふたば幼稚園に欠かせない大黒柱の一人となっています。
