上野動物園の通常営業における基本スケジュールは、開園時間が午前9時30分、閉園時間が午後5時（17時00分）と定められています。ここで注意が必要なのは、入園券の販売および最終入園受付が閉園1時間前の「16時00分」で締め切られるという点です。園内は東園・西園を合わせて約14ヘクタールもの広大な敷地を有しているため、16時に入園した場合は主要な動物を数種類観覧するだけでタイムアップとなってしまいます。
また、動物たちの健康管理や獣舎収容の都合上、一部の動物は16時を過ぎると寝室へ収容され展示が終了します。お目当ての動物を確実に観察したい場合は、遅くとも14時半前には入園を済ませておくのが現実的な行動ラインといえます。
定期休園日は毎週月曜日です。ただし、月曜日が国民の祝日や振替休日、あるいは「都民の日（10月1日）」に該当する場合は月曜日が開園となり、その翌平日が振替休園日となります。遠方から訪れる旅行者や有給休暇を利用して平日に来園を計画している方は、連休明けの火曜日が休園になっていないかを必ずカレンダーで照合してください。
年末年始の営業スケジュールに関しては、12月29日〜翌年1月1日の4日間が休園となり、年始は1月2日から特別開園するのが通例です。さらに、毎年8月中旬のお盆期間には、開園時間を20時00分まで3時間延長する「真夏の夜の動物園（ナイトズー）」が開催され、昼間とは全く異なる夜行性動物の生態を観察できるプレミアムな機会として定着しています。
