大室温泉まきばの湯へのアクセスは、マイカーやレンタカーの利用が最もスムーズです。上信越自動車道の長野インターチェンジまたは須坂長野東インターチェンジから車で約15〜20分の距離に位置しています。
施設直前は緩やかな坂道となりますが、広々とした無料駐車場（約50台収容）が完備されているため駐車のストレスはありません。公共交通機関を利用する場合は、JR長野駅よりバスで松代方面へ向かい、タクシーを併用するルートが一般的です。松代城跡や真田宝物館などの歴史散策と組み合わせた観光ドライブコースとしても最適な立地となっています。
