冷凍母乳を与える際、最も神経を使うべき工程が解凍プロセスです。母乳に含まれる分泌型免疫グロブリンA（sIgA）やラクトフェリン、各種ビタミン、リパーゼなどの消化酵素は熱に非常に弱い性質を持っています。
母乳の正しい解凍方法と湯煎手順は、二段階のステップを踏むのが最も安全です。まず、授乳予定の数時間〜半日前に冷凍庫から冷蔵庫へ移し、時間をかけてゆっくり半解凍状態（緩慢解凍）にします。急ぎの場合は、水道の流水（常温水）にパックごと当てて液体状に戻します。
完全に液体に戻った後、40℃前後のぬるま湯をボウルなどの容器に張り、パックまたは移し替えた哺乳瓶を浸して人肌（約37℃〜38℃）まで優しく温めます。熱湯（50℃以上）に浸すとタンパク質が変性し、重要な免疫物質が瞬時に失活してしまうため、給湯器の温度設定を40℃前後に指定して湯煎するのが確実です。温めた後は、成分が分離していることがあるため、容器を激しく振らずに手首を使って円を描くように静かに回して均一に混ぜ合わせます。
ここで多くの人が疑問に思うのが、母乳の自然解凍がダメな理由です。室温での自然解凍は、外側から徐々に溶けていく過程で表面温度が雑菌の繁殖至適温度帯（20℃〜40℃）に長時間さらされることになります。母乳は菌にとって最高の栄養源であるため、常温放置による自然解凍は細菌の爆発的増殖を招き、赤ちゃんの急激な下痢や嘔吐、最悪の場合は重篤な消化管感染症を引き起こす要因となります。
また、母乳解凍後の消費期限は極めて短く設定されています。冷蔵庫内で完全解凍された時点から24時間以内が使用限度です。一度湯煎などで人肌に加温した母乳については、加温開始から1〜2時間以内に飲ませ切らなければなりません。
